關(guān)鍵質(zhì)量屬性（CQA），如國(guó)際協(xié)調(diào)理事會(huì)（ICH）Q8指南所述，是指產(chǎn)品的物理、化學(xué)、生物或微生物數(shù)值或特征，這些指標(biāo)應(yīng)被適當(dāng)地限制在某些范圍內(nèi)，以確保產(chǎn)品有效所需的產(chǎn)品質(zhì)量。成品的CQA至關(guān)重要，因?yàn)樗鼈儠?huì)影響產(chǎn)品在質(zhì)量、功效和安全性方面的性能。這些屬性可能會(huì)影響雜質(zhì)、效力、穩(wěn)定性、藥物釋放和微生物量等規(guī)格。近年來，美國(guó)食品藥品監(jiān)督管理局（FDA）一直對(duì)確定局部半固體劑型的CQA感興趣，這些劑型需要持續(xù)監(jiān)測(cè)以確保微觀結(jié)構(gòu)的相似性。在這一點(diǎn)上，局部半固體劑型的質(zhì)量屬性，包括pH、球大小、藥物顆粒大小、流變行為、藥物多晶型、溶解/未溶解藥物比例等均可能對(duì)治療性能實(shí)現(xiàn)至關(guān)重要。在關(guān)于氨苯砜的指南草案中，美國(guó)食品藥品監(jiān)督管理局建議仿制藥物申請(qǐng)人使用相同的成分、相同含量的相同成分、經(jīng)評(píng)估半固體產(chǎn)品微觀結(jié)構(gòu)的CQA，以及使用體外藥物釋放IVRT和體外滲透IVPT，對(duì)仿制產(chǎn)品與原研產(chǎn)品進(jìn)行有效的比較。

我們這次根據(jù)美國(guó)《Draft Guidance on Dapsone》指南建議（原文下載鏈接在文章末尾），旨在利用體外概念驗(yàn)證來評(píng)估氨苯砜仿制凝膠與其原研產(chǎn)品（Aczone凝膠）CQA的微觀結(jié)構(gòu)相似性。研究中，使用了物理化學(xué)表征分析評(píng)估了原研凝膠和仿制凝膠的CQA與微觀結(jié)構(gòu)之間的關(guān)系，這些表征包括pH測(cè)定、顯微鏡圖像、多晶型、流變行為、體外釋放試驗(yàn)（IVRT）、體外滲透試驗(yàn)（IVPT）和角質(zhì)層（SC）膠帶剝離研究。此外，在室溫下對(duì)測(cè)試凝膠在鋁管中的穩(wěn)定性進(jìn)行了6個(gè)月的監(jiān)測(cè)。

本文是一份非常標(biāo)準(zhǔn)的原研凝膠與仿制凝膠一致性評(píng)價(jià)的示例，供廣大研究同仁分享。

2.1 物料

實(shí)驗(yàn)室配制了兩批氨苯砜仿制品凝膠，而原研產(chǎn)品為Aczone凝膠。

2.2 外觀評(píng)價(jià)

原研凝膠和仿制凝膠的外觀（即稠度、顏色、氣味）按照氨苯砜指南草案的建議進(jìn)行了定性評(píng)估。

2.3 pH值評(píng)價(jià)

使用經(jīng)校準(zhǔn)的pH計(jì)在25±2℃下測(cè)量原研凝膠和仿制凝膠的pH。

2.4 顯微分析

使用偏振光顯微鏡觀察原研凝膠和仿制凝膠中氨苯砜的粒度分布和結(jié)晶傾向。將少量凝膠放置在蓋玻片和載玻片之間，然后以x10的放大倍數(shù)觀看凝膠圖像。

2.5 X射線衍射（XRD）分析

X射線衍射（XRD）數(shù)據(jù)是使用配備有Cu-K輻射源（λ=1.54060 A°）的X射線衍射儀獲取的。掃描角度范圍為2°至40°，2θ步長(zhǎng)為0.02°，計(jì)步時(shí)間為0.6s/步。凝膠的XRD分析中采用40kV的電壓和30mA的電流。

2.6 流變行為評(píng)價(jià)

使用流變儀驗(yàn)證原研凝膠和仿制凝膠的流變行為，該流變儀配備有溫度控制器和錐板裝置（直徑35mm，錐角1°，間隙寬度0.053mm）。對(duì)于每個(gè)測(cè)試，將大約1.0g的凝膠放在下板上，然后緩慢地提起錐體。松弛5分鐘后，在25.0±0.2℃下進(jìn)行測(cè)量。然后，依次運(yùn)行以下測(cè)試程序，以表征每個(gè)樣品的流變特性。使用Rheology Solutions軟件計(jì)算所有流變學(xué)參數(shù)。

2.6.1剪切流實(shí)驗(yàn)

為了確定凝膠的流變特性和粘度（η）值，以0–100 s-1范圍內(nèi)的剪切速率（?）進(jìn)行100 s的流變曲線測(cè)試獲取，并運(yùn)用Ostwald de Waele模型對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行擬合，并以相關(guān)系數(shù)表征擬合度（r2>0.99）。

2.6.2觸變性

樣品的觸變性是在0–200 s-1的剪切速率下獲取的，在200 s-1期間再次降至0 s-1，而平均瞬時(shí)動(dòng)態(tài)粘度是在200 s-1的恒定剪切速率下經(jīng)過30 s測(cè)量獲取的。

2.6.3振蕩分析

首先，因?yàn)閼?yīng)力與應(yīng)變成正比，儲(chǔ)能模量（G'）保持不變，所以在1 Hz的恒定頻率下，在0.01–100 Pa的應(yīng)力條件下，掃描待測(cè)樣品，并計(jì)算每個(gè)樣品的線性粘彈性區(qū)域。在對(duì)樣品施加恒定剪切應(yīng)力（0.1 Pa）后，在0.1–100 Hz的頻率范圍內(nèi)，對(duì)樣品進(jìn)行所有頻率掃描測(cè)量。然后，確定了儲(chǔ)能模量（G'）、損耗模量（G“）和損耗角正切（tanδ）。

2.7 HPLC分析

通過配備UV檢測(cè)器的高效液相色譜（HPLC）系統(tǒng)對(duì)從化學(xué)穩(wěn)定性測(cè)試、IVRT和IVPT研究中獲得的樣品進(jìn)行定量分析。所使用的色譜方法如表1所示。分析方法使用前，對(duì)其選擇性、線性、準(zhǔn)確性和精密度進(jìn)行了方法學(xué)驗(yàn)證。校準(zhǔn)曲線的回歸值（r2）大于0.999。以平均回收率的百分比表示的準(zhǔn)確度為95–105%；精密度小于2%的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）。將釋放介質(zhì)和皮膚提取物樣品的色譜圖進(jìn)行比較顯示，氨苯砜沒有被干擾峰干擾，證實(shí)了分析方法的選擇性。

2.8 IVRT評(píng)價(jià)

IVRT測(cè)試方法如下表2所示：

2.9 IVPT評(píng)價(jià)與（TS）角質(zhì)層藥物透過性研究

使用豬背部皮膚和Franz擴(kuò)散池進(jìn)行24小時(shí)的體外滲透試驗(yàn)（IVPT）。使用含有1%牛血清白蛋白（w/v）的磷酸鹽緩沖液（pH 7.4）作為受體介質(zhì)以維持漏槽條件。IVPT實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，仔細(xì)清潔皮膚樣本，并將膠帶（如下圖）施用在清潔過的皮膚上20次，并用滾筒按壓膠帶&皮膚表面以避免皮膚皺紋的影響。每一條膠帶施用后都快速移除。將包含角質(zhì)層和殘留皮膚的膠帶在乙腈中提取24小時(shí)后，將提取液樣品渦旋5分鐘，并通過0.45μm PTFE膜過濾器進(jìn)行過濾。使用經(jīng)驗(yàn)證的高效液相色譜法對(duì)含有角質(zhì)層、殘留皮膚和受體介質(zhì)中的提取液樣品中的氨苯砜含量進(jìn)行定量。

2.10 凝膠穩(wěn)定性

評(píng)估了在室溫（25±2℃和60%±5%相對(duì)濕度[RH]）條件下儲(chǔ)存在鋁管中的6個(gè)月的仿制凝膠的穩(wěn)定性。仿制凝膠的穩(wěn)定性評(píng)估包括：儲(chǔ)存0個(gè)月、3個(gè)月和6個(gè)月后，檢查外觀、pH、動(dòng)態(tài)粘度、定量分析和IVRT測(cè)試（方法見表2）。

對(duì)于定量測(cè)定，將0.125g凝膠溶解在25mL流動(dòng)相中，并用50mL流動(dòng)相稀釋。然后，通過0.45μm PTFE膜過濾器過濾樣品，并使用經(jīng)驗(yàn)證的HPLC方法定量藥物濃度（表1）。

原研凝膠和仿制凝膠的動(dòng)態(tài)粘度是使用如前所述的流變儀測(cè)量的。此外，如前所述所示，進(jìn)行了pH和IVRT研究。

2.11 統(tǒng)計(jì)分析

實(shí)驗(yàn)結(jié)果以至少三個(gè)實(shí)驗(yàn)的平均值±SD表示（n=3）。使用GraphPad Prism軟件（6.05版）進(jìn)行單方差分析（ANOVA）進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析。使用多重比較試驗(yàn)對(duì)處方進(jìn)行比較，p≤0.05被認(rèn)為是顯著性差異。

3.1 外觀評(píng)估結(jié)果

外觀測(cè)試（即外觀、顏色、氣味等）有助于快速比較凝膠，并確保在儲(chǔ)存過程中不會(huì)出現(xiàn)相分離、水不會(huì)從凝膠中溢出以及產(chǎn)品發(fā)生顏色/氣味變化。兩批供試品和原研藥物在配制時(shí)和儲(chǔ)存6個(gè)月后均為白色、均勻、無氣味的凝膠。

3.2 pH評(píng)估結(jié)果

pH可以影響藥物分子的穩(wěn)定性、半固體產(chǎn)品的流變行為以及產(chǎn)品中防腐劑的有效性。配制后和儲(chǔ)存6個(gè)月后，原研凝膠和仿制凝膠的pH值均在6.0和6.6之間。

3.3 顯微觀察

在所有產(chǎn)品中，氨苯砜API顆粒具有相似的尺寸和均勻的分布。然而，仿制凝膠中的氨苯砜顯示出菱形晶體（圖1c和1d），而原研凝膠則包含針狀晶體（圖第1a段）。在仿制凝膠實(shí)驗(yàn)室制備中我們可以觀察到菱形和針狀晶體（圖1b）。可能是凝膠的批量大小或生產(chǎn)工藝引起了這種差異。

3.4 X射線衍射研究

眾所周知，許多藥物可能以一種以上的晶體形式存在，具有不同的穩(wěn)定性、溶解度和生物利用度特征。對(duì)藥品中氨苯砜多晶型的分析是一個(gè)關(guān)鍵的評(píng)估參數(shù)，因?yàn)榘北巾吭?/span>工藝過程中可以轉(zhuǎn)化為五種晶型中的任何一種。如圖2所示，XRD圖譜在相同的位置上顯示出許多尖銳的峰，表明產(chǎn)物中存在多晶型。此外，仿制凝膠中約21°處的特征峰值的大小與原研凝膠中的峰值相似。

3.5 流變行為

流變是非牛頓流體的半固態(tài)劑型表現(xiàn)出的一個(gè)基本特征。然而，該產(chǎn)品的粘度很難通過基于單一剪切速率的方法來確定。因此，產(chǎn)品的粘度被證明為是反映剪切應(yīng)力作為剪切速率函數(shù)的流變曲線。此外，某些氨苯砜指南建議在確定低或高剪切平臺(tái)之前，在可達(dá)到的剪切速率范圍內(nèi)評(píng)估質(zhì)量和性能（5）。此外，產(chǎn)品的粘彈性是一個(gè)關(guān)鍵因素，它以頻率掃描的形式出現(xiàn)，反映了頻率增加時(shí)的儲(chǔ)存模量（G’）和損失（G”）模量（17）。

圖3A顯示，原研凝膠和仿制凝膠顯示出相對(duì)相似的剪切應(yīng)力（或粘度）與剪切速率的流變曲線。圖3B顯示，原研和仿制產(chǎn)品顯示出被稱為剪切變薄的偽塑性流變，以及塑性和偽塑性系統(tǒng)*的觸變行為。振動(dòng)數(shù)據(jù)顯示，在每種產(chǎn)品的所有頻率范圍內(nèi)，G’值（>450.4 Pa）都大于G”值（<214.9 Pa），表明具有強(qiáng)凝膠結(jié)構(gòu)的粘彈性行為。損耗角正切值（tanδ=G“/G'）小于1（范圍：0.277–0.362）；隨著tanδ的減小，凝膠的彈性增加，粘度降低。但總體而言，仿制凝膠的流變行為與原研凝膠相似。

3.6 IVRT測(cè)試

評(píng)估藥物產(chǎn)品的質(zhì)量和性能需要計(jì)算產(chǎn)品的擴(kuò)散系數(shù)（又叫藥物釋放速率）。在圖4中，根據(jù)Higuchi動(dòng)力學(xué)模型，原研凝膠和仿制凝膠的體外藥物釋放曲線顯示出線性特征（r2>0.98）。此外，原研凝膠（145±6.57µg/cm2/h-1/2）和仿制凝膠（批號(hào)1和批號(hào)2分別為141±5.98和141±6.67µg/cm/h-1/2）的擴(kuò)散系數(shù)之間沒有顯著差異，表明仿制藥物的藥物釋放速率和動(dòng)力學(xué)與原研是等效的（p>0.05）。

3.7 IVPT測(cè)試與膠帶剝離實(shí)驗(yàn)

由于IVPT推測(cè)藥物能夠通過皮膚滲透，所以膠帶剝離研究顯示，藥物在皮膚最外層（角質(zhì)層）積聚。IVPT測(cè)試結(jié)果如圖5所示。IVPT測(cè)試結(jié)果顯示，24小時(shí)內(nèi)，原研凝膠和仿制凝膠的受體介質(zhì)中均未檢測(cè)到氨苯砜，表明藥物未通過皮膚滲透到血液循環(huán)中。膠帶剝離研究還表明，所有測(cè)試產(chǎn)品的角質(zhì)層和表皮&真皮中都有等量的氨苯砜（p>0.05）。

3.8 制劑穩(wěn)定性

穩(wěn)定性研究是藥物開發(fā)過程中的重要組成部分，監(jiān)管機(jī)構(gòu)需要對(duì)穩(wěn)定性研究結(jié)果進(jìn)行審查，以鑒定產(chǎn)品能夠在保存期內(nèi)維持高質(zhì)量。在本研究中，穩(wěn)定性數(shù)據(jù)顯示，在25±2℃和60%±5%相對(duì)濕度下儲(chǔ)存6個(gè)月后，仿制凝膠的外觀、pH和粘度值沒有顯著變化（表3）。類似地，儲(chǔ)存6個(gè)月后，測(cè)定IVRT結(jié)果也沒有顯示出顯著差異，表明凝膠的物理和化學(xué)穩(wěn)定性。

產(chǎn)品的CQA包括物理、化學(xué)、生物和微生物數(shù)量或特性，這些屬性或特性應(yīng)在適當(dāng)?shù)南薅取⒎秶蚍植挤秶鷥?nèi)，可確保藥品的質(zhì)量符合要求。近年來，藥物監(jiān)管機(jī)構(gòu)專注于基于微觀結(jié)構(gòu)相似性來鑒定局部半固體劑型的CQA。所以在本次分享中，根據(jù)美國(guó)藥典和美國(guó)食品藥品監(jiān)督管理局《Guidance on Dapsone》指南及Elmira Kalami等的研究成果，將氨苯砜仿制凝膠的關(guān)鍵質(zhì)量和性能屬性與原研產(chǎn)品（Aczone凝膠）進(jìn)行了比較，以呈現(xiàn)整個(gè)半固體制劑仿制藥研發(fā)的流程。結(jié)果表明，仿制的氨苯砜凝膠具有與原研凝膠相當(dāng)?shù)馁|(zhì)量和性能。當(dāng)在室溫條件下儲(chǔ)存6個(gè)月后，仿制產(chǎn)品在物理和化學(xué)上是穩(wěn)定的；未來的研究可進(jìn)一步評(píng)估仿制藥物24個(gè)月的穩(wěn)定性。